甲基化特异性PCR(MSP)
【技术简介】
(1)技术原理
甲基化特异性的PCR是一种灵敏度高且操作相对简单的甲基化研究方法。重亚硫酸盐处理DNA后,基因组DNA发生的由甲基化状态决定的序列改变。随后进行引物特异性的PCR。该方法引物设计是关键。MSP中设计两对引物,即一对结合处理后的甲基化DNA链(引物对M),另一对结合处理后的非甲基化DNA链(引物对U)。检测MSP扩增产物,如果用引物M能扩增出片段,则说明检测位点存在甲基化;若用引物U扩增出片段,则说明被检测的位点不存在甲基化。
(2)技术应用
肿瘤的早期预测、分类分级、预后评估及多种疾病的分析;转录水平分析:位于启动子区域的甲基化一般会抑制转录;细胞凋亡等调控机制的研究。
【服务内容】
根据待测基因序列设计相应引物;基因组DNA的提取和质量检测;亚硫酸氢钠修饰基因组DNA;修饰后DNA纯化回收;根据实验的要求进行BSP或者qMSP实验;实验结果的分析以及向客户提供实验报告。
【客户须知及标本要求】
(1)组织样品:新鲜组织放入液氮或-80度保存,组织不少于100mg;
(2)培养细胞:通过细胞计数取不少于2×106个细胞于EP管,加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-80℃,避免反复冻融);
(3)血液细胞标本:以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白?;ぜ粒4妫?span>-80℃可长期保存,避免反复冻融);
(4)血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入EP管,保存(4℃可保存15-20天,-80℃可长期保存,避免反复冻融);
(5)样本运输:可选择以下任何一种方式寄送标本
组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后,加冰袋寄送;
细胞样本也可直接寄送培养瓶(密封保证不污染、培养液不漏出);
血清或上清液直接加冰袋寄送(运送视路程远近2-3天可到达)。