同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)
(1)技术原理
iTRAQ(Isobaric tag for relative and absolute quantitation)是一种新的、功能强大的可同时对四种样品进行绝对和相对定量研究的方法。iTRAQ试剂为可与氨基酸N端及赖氨酸侧链连接的胺标记同重元素(isobaric)。在质谱图中,任何一种iTRAQ试剂标记的不同样本中的同一蛋白质表现为相同的质荷比。而在串联质谱中,信号离子表现为不同质荷比(114~117)的峰,因此,根据波峰的高度及面积,可以得到蛋白质的定量信息。
(2)技术应用
机理和调控机制研究,动态过程中机制研究 ;疾病标志物的筛选,用药及预后标志物筛选。
【服务内容】
蛋白提取及定量;iTRAQ试剂标记;液相分离、质谱鉴定;数据库检索和数据分析;生物信息学分析。
(1)客户须明确检测目的和具体要求,最好能提供1~2篇文献或资料。
(2)植物标本:将叶片/花/根/茎/果实剪下,用无菌双蒸水洗净;用锡箔纸包好后放入液氮或者-80℃冰箱保存。
(3)组织标本:采集新鲜组织,切为小块,组织块用冷的PBS或生理盐水洗净。将离心沉淀后的组织块用锡箔纸包裹,样本放入液氮或-80℃冰箱中保存,干冰运输。