免疫沉淀
(1)技术原理
免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与Protein A/G或二抗偶联的agaose或Sepharose beads孵育,通过离心得到beads-protein A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物,沉淀经洗涤后,重悬于电泳上样缓冲液,煮沸5-10 min,在高温及还原剂的作用下,抗原与抗体解离,离心收集上清,上清中包括目的蛋白和少量的杂蛋白。
(2)技术应用
免疫沉淀常用于测量蛋白质抗原的相对分子质量,监控其翻译后修饰,研究蛋白质的半衰期等。
【服务内容】
蛋白质抽取与定量;IP产物的SDS-PAGE;IP(以normal lgG作为对照);western blot或质谱分析。
(1)客户须明确检测目的和具体要求,最好能提供1~2篇文献或资料;
(2)客户提供待检测样品、免疫沉淀用抗体(也可由我方代购);
(3)待检测样品可以是直接待检测蛋白样品,也可以是细胞、组织或细菌样品,需加收蛋白抽提费用。样本收集后应立即-80℃保存。